电泳制胶的操作步骤和电泳胶的配制是实验室中常用的技术,广泛应用于生物化学、分子生物学等领域,下面详细介绍电泳制胶的操作步骤和电泳胶的配制方法。
电泳制胶操作步骤:
1、准备工作:清洗制胶玻璃板,确保洁净无污渍,根据实验需求选择适当的梳子,并对其进行清洗和整理。
2、配制凝胶液:根据目标分子量选择合适的凝胶浓度,按照凝胶配方将各成分按比例混合,充分搅拌至均匀。
3、制胶:将混合好的凝胶液缓慢地倒入已清洗干净的玻璃板中,避免产生气泡。
4、放置梳子:在凝胶液上轻轻放置梳子,确保梳子齿尖与凝胶液接触处无气泡。
5、等待凝固:让凝胶在室温下自然凝固,期间避免移动或震动。
6、电泳:待凝胶凝固后,将其放入电泳槽中,加入电泳缓冲液,按照正负极方向进行电泳。
7、染色与脱色:电泳结束后,将凝胶取出进行染色,通常使用考马斯亮蓝染色液,染色完成后进行脱色,可使用多次漂洗或浸泡在脱色液中的方法。
电泳胶的配制方法:
以配制聚丙烯酰胺凝胶(PAGE)为例,其成分包括丙烯酰胺、甲叉双丙烯酰胺、Tris缓冲液、超纯水、过硫酸铵(AP)和TEMED,具体配方如下:
1、选择适当浓度的凝胶液配方,例如8%的分离胶配方包括水、30%丙烯酰胺、pH为8.8的Tris缓冲液、10%SDS、过硫酸铵和TEMED。
2、按照配方将各成分按比例混合,充分搅拌至均匀,注意加入TEMED后的反应速度会非常快,因此需迅速混合并尽快倒入制胶板中。
信息仅供参考,实际操作中请根据具体实验需求和实验室条件进行调整,建议在操作前阅读相关文献或实验室手册,确保操作的准确性和安全性。